1樓:匿名使用者
1. 細胞rna提取物
來中的最大含量就
源是rrna,相對含量比較穩定,用來控制你的加樣量。你平時測rna濃度,實際上的數值就是rrna的濃度。如果你跑膠,肉眼能看到的就是2條rrna的條帶。
2. 注意點:一定要稀釋!!!
,切記。不然18s rrna的擴增曲線在5個迴圈就飽和了,無法比較定量。一般如果不是在同一個管中測目標基因和內參的話,做內參的那個管子樣本要稀釋100倍。
3. 其他house keeper基因也可以做內標,比如gapdh,或者β-actin。都是一些表達恆定,水平較高的基因
請教pcr內標 對照
2樓:初夏之橙
內參就是模板中除了你的目的基因,還要有一個這個模板中肯定存在的基因,用來檢測你模板的質量。也就是說,如果在同一模板中,如果你沒擴出目的基因,但擴出了內參,就說明不是模板的問題。
陽性對照就是你的實驗應該出現的結果,就是用你的結果和陽性對照對比用。
陰性對照就是本底,起排除干擾的作用。
關於實驗原理的問題,建議看《分子生物學實驗指南》。
實時熒光定量pcr內參是什麼東西
3樓:禾鳥
1、實時熒光定量pcr內參:
在不同的pcr反應管中已定量的內參和引物,內參用基因工程方法合成。上游引物用熒游標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內參也被擴增。
在pcr產物中,由於內參與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內參為對照定量待檢測模板。
2、選擇:內參一般是固定的,可以用實驗室之前就有的。或者用基因工程方法合成。上游引物用熒游標記,下游引物不標記。
擴充套件資料
(1)內參在傳統定量中的作用:
由於傳統定量方法都是終點檢測,即pcr到達平臺期後進行檢測,而pcr經過對數期擴增到達平臺期時,檢測重現性極差。同一個模板在96孔pcr儀上做96次重複實驗,所得結果有很大差異,因此無法直接從終點產物量推算出起始模板量。
加入內參後,可部分消除終產物定量所造成的不準確性。但即使如此,傳統的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法。
(2)內參對定量pcr的影響:
若在待測樣品中加入已知起始拷貝數的內標,則pcr反應變為雙重pcr,雙重pcr反應中存在兩種模板之間的干擾和競爭,尤其當兩種模板的起始拷貝數相差比較大時,這種競爭會表現得更為顯著。
但由於待測樣品的起始拷貝數是未知的,所以無法加入合適數量的已知模板作為內參。也正是這個原因,傳統定量方法雖然加入內參,但仍然只是一種半定量的方法。
4樓:小笑聊情感
實時熒光定量pcr內參是一種在dna擴增反應中,以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應(pcr)迴圈後產物總量的方法。通過內參或者外參法對待測樣品中的特定dna序列進行定量分析的方法。
5樓:匿名使用者
內參就是一個表達量在各個組基本保持不變的基因,又叫看家基因,比如常用的gapdh, actin。或者18s rrna也可以。
如果內參表達量一致,說明你pcr的上樣量一致,樣本的質量也一致。如果出入很大,說明你的樣本的濃度或者是質量有問題。測到的目的基因的表達量就不可靠了
6樓:匿名使用者
管家基因,具體可以諮詢公司,也可以自己看文獻,常用的有gapdh,beta-actin和18srna,根據不同的**選用不同的管家基因,比如gapdh就被人詬病做癌細胞基因時超不準。。。
7樓:xueling黃
如果對內參要求很高的話,可以篩選合適內參,有免費的軟體,比如genorm,normfinder等
我要用ct法做熒光定量pcr,請問需要做標準曲線嗎
8樓:北京索萊寶科技****
最好是做標準曲線,要看看擴增效率的.
調cdna就還了~
為什麼實時熒光定量pcr做不出來,普通pcr可以
為什麼實時熒光定量pcr做不出來,普通pcr可以普通的pcr大多數是定性實驗回 而實時熒光定量pcr則定量和答定性都可以做。應用領域也不一樣,普通pcr一般應用於基因組克隆 dna測序 rna反轉錄等,而實時熒光定量pcr一般應用於mrna表達量分析 絕對定量 蛋白表達 snp分析 陰陽性解析等領域...
做相對定量pcr時目的基因ct值比內參基因ct值
有多種原因。如果根據經驗目的基因的表達確實應該低於內參基因的話，常見的問題是模板異常，如嚴重的dna汙染等。但也不排除其他原因，如引物特異性等。目的基因的ct值小於內參基因，這個內參基因還能用嗎 如何通來過熒光定量目源的基因和gapdh計算相對錶達bai量內du參就是一個表達量在zhi 各個組基本保...
用C語言做以下題目，請教高手最好除錯一下！用最簡單的語句哈，要不看不懂哈
0 include main 1 include main 先給你這麼多，不帶要編了 才20分在加點我繼續累累 等待有緣人吧 這都嚇死人了 你一下弄那麼多，誰還想給你編啊，是吧？這也太多了，自己編吧 一道簡單的c語言題目。請教高手詳細解答！謝謝！a 錯誤是因為轉義字元它是由反斜線加一個特定的字元構成...