1樓:匿名使用者
呵呵,我做y2h很久了。
baidupgbkt7和pgadt7不要同時轉入細胞zhi,要先轉入一個,平板培養,dao挑單菌落做液體版培養,再權轉入另一個質粒,同時轉入兩個質粒的效率太低。我做的時候轉化率很高,從來沒有出現過問題,轉入第一個質粒(pgbkt7)通常在sd-trp平板上可以有3000-4000個菌落,再轉入pgadt7後,在雙選擇平板sd-trp-leu上至少也可以收穫400-500個菌落。需要注意的是,細胞轉入pgbkt7後,在-trp上挑選單菌落做液體培養時,不要用ypd培養液,要用sd-trp培養液,這樣才可以使轉化的細胞充分生長。
轉化實驗的條件也很重要,如果你覺得這中間有什麼不放心,你可以把protocol發給我看看。我這裡ah109長得很好,但實驗室在國外,估計沒法給你。
另外,你說ah109培養不好,是在什麼選擇平板上?在轉完兩個質粒以後做實驗篩選時,應該先做lacz和mel1的顯色,再做his3,最後做ade2(因為ade2的選擇是最stringent的)。還有什麼問題可以繼續問我。
如果你願意,可以把你的質粒郵寄給我,我免費幫你做一下都可以。
我做酵母雙雜交的菌種ah109最近在ypd培養基上培養,菌落是白色還是粉紅色的呢?要是被汙染了這麼鑑定呢?
2樓:匿名使用者
菌落變粉一般不bai是汙染du,是yeast ge***ics中一個常見現象。當細胞在zhi
平板培養幾天後,平
dao板上的adenine被酵專母消耗完屬畢,酵母試圖通過自身代謝途徑合成adenine以供利用,代謝途徑請見http://****phys.
ksu.edu/gene/genefaq.html。
然而,ah109經過ade2基因敲除,adenine合成途徑被阻礙。又由於其ade4,5,6,7,8基因均正常,所以造成p-ribosylamino imidazole(air)在細胞中積累而使菌落變為粉紅色。
粉紅色菌落在y2h實驗中不會造成問題,只是因其細胞中缺乏adenine致使生長速度較白色菌落略緩。在培養基中新增過量adenine會解決此問題,但並無太大必要。
酵母雙雜交實驗的時候,ah109與y187 mating之後,如何塗板才能保證板子上的斑不會很多? 10
3樓:紅磚領主
你弄個稀釋梯度,做個預實驗看看唄。
誰知道你具體實驗條件控制的怎麼樣...
酵母宿主細胞ah109和y190有什麼區別
4樓:匿名使用者
酵母宿主細胞ah109和y190主要是篩選方式和用途的側重點不同
酵母宿主細胞ah109株為色氨酸營養缺陷,可作為蛋白真核表達系統,也可用於酵母雙雜交。
酵母菌株y190更多用於酵母雙雜交。
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