最近做ELISA測抗體的效價,陰性值和空白孔值都很高,陰

2021-05-15 14:17:07 字數 3184 閱讀 1898

1樓:匿名使用者

覺得你沒有說清楚。elisa有好多種呢,比如直接法,間接法等。能在說清楚點嘛?此外,我覺得你的實驗設計好像不全面,能告訴怎麼設計的嗎?謝謝!

elisa,陰性對照,陽性對照及空白對照是怎麼回事

2樓:南京金益柏

什麼是「有效性」(validity)?要獲得準確的檢測結果「有效性」評價,就會關係到:為什麼要設定「陰性、陽性和空白」等不可缺少的三項對照?

要用什麼樣的物質擔當「陰性、陽性和空白對照(品)」?這「三項對照」如何設定、需要設定幾個孔位?獲得的測定值如何「認可、取捨與計算」?

隨後,又如何依照陽性對照均值(pcx)與陰性對照均值(ncx)的差值(p-n,或n-p)大小做出「試驗結果有效性」的最終裁決呢?…等等。

elisa檢測,按照試劑說明書要求,每次試驗、每塊扳上都要設定以下3項對照和用途:

2.陰性對照(品):

(1)陰性對照(品)的概念與要求:所謂陰性對照(品),應當是本項檢測試驗中採用與待撿物(樣品、人用試劑就是人的血清等)具有同源性和同質性,又不含有待檢物質,並能客觀比較和鑑別處理因素(血清免疫學試驗中有特異性抗原與抗體反應)之間的差異。因此,用動物血清或其製品(如牛血清白蛋白等)代替陰性人血清作為對照品,從理論和實踐上都是不可取的,弊端甚多,無須細述。

注意:據我所知,國產elisa試劑中,有的廠牌是用動物血清製品稀釋配置、或與部分人血清混合配置的;其二,陰性對照讀數,並非是「越低越好」。ncx值接近0.

00x水平,這是假象!試想一下,真正採用「陰性人血清」的陰性對照品,ncx值會如此之低嗎?舉個例子,雅培乙肝六項eia試劑的ncx值,分別為:

0.010(hbsag)、0.027(抗—hbs)、0.

035(hbeag)、1.083(抗—hbe)、1.065(抗—hbc)、0.

045(抗hbc-igm)。生物梅里埃的hiv試劑ncx是0.091。

辨別試劑ncx值是否合理的一個很簡單的方法,只要對比大量陰性樣本的實際讀數就「一目瞭然」啦!

一個題外插曲:表明elisa試劑內在質量的一個重要統計標誌,就是要看:陰性樣本的的上限不應當大於、必須小於c.

o.i.=1.

00;反之,陽性樣本的的下限不可小於、應當大於c.o.i.

=1.00!

(2)陰性對照(品)分為兩類

一是代表受檢人血清中並不含有、或方法學靈敏度未能檢出的待檢物的基準水平,並且是結果判斷值(cut off)計算式中決定「是」(陽性)、或「否」(陰性)的唯一可變值。陰性對照值高,導致假陰性;反之,導致假陽性。如:

hbsag、hbeag、抗—hbc等。二是陰性對照設定,在方法學上要求加入指示性定量標準品,如中和劑hbeag,定量hbcag等,用以檢測抗—hbe、抗—hbc。或者,選取代表平均水平的正常人血清用作陰性對照,如檢測抗—hbc igm。

此類cut off 值計算時,多數均包括陰性和陽性對照值2個可變值。

3.陽性對照(品):

(1)陽性對照(品)的概念與要求:同陰性對照(品),只是採用「精選」的含有待檢物質的人血清製備而成。所謂「精選」,就是把收集的陽性人血清經過數種試驗進行「篩試」、把含有「干擾性物質」的血清剔除、不用,以避免出現「假陽性」干擾試驗結果。

(2)陽性對照(品)設定,也可區分為兩種型別與用途:

一是陽性對照主要用於評價該項試驗結果是否有效和試驗結果的穩定性與可比性。而所設的陽性對照的測量值不列入cut off值計算、但是不可不做。如hbsag、抗—hbs、hbeag等。

二是陽性對照的設定,不僅用於評價試驗結果是否有效和試驗結果的穩定性與可比性,而且計入cut off的計算。此時的cut off值的含義是代表該標誌物在健康(正常)人群中正常值範圍的上限。待檢樣本檢測值超過該上限(cut off)時表示有診斷意義。

例如抗—hbe、抗—hbc、抗—hbc igm等。

間接elisa 的結果怎麼看效價

3樓:南京金益柏生物科技****

知道你用的方法是自己建立的,還是試劑盒?就檢測結果來說,確實有些問題。本底很高,很難看出效價是多少。

一般空白值和陰性不高於0.2,最好控制在0.1以內,陽性對照1.

0左右。如果只是粗略的估計一下,按p/n>2來計算即刻測出效價(試劑盒按盒中的方法來計算)。陽性、陰性、空白對照不需要做這麼多的,每個做兩孔取平均就可以了。

如果顏色與檢測有明顯出入,考慮是不是酶標儀有問題,可以整板檢測水與有色的底物液看看孔與孔之間的值是否有差異。

此外還可以用瓊擴法來檢測抗體效價。

elisa空白和陰性對照這樣設定可以嗎

4樓:南京金益柏生物科技****

用稀釋液代替檢測樣本、用以觀測最終反應的顯色「本底」、並用回於酶標儀消除、扣除「本底」,即:答以本底為「零」讀取陽性、陰性對照孔和樣本檢測孔的吸光值(a);或者,在計算陰性對照均值(ncx)、陽性對照均值(pcx)、樣本讀數的s/c.o.

值時減去空白對照的本底吸光值。

陰性對照,應當是本項檢測試驗中採用與待撿物具有同源性和同質性,又不含有待檢物質,並能客觀比較和鑑別處理因素(血清免疫學試驗中有特異性抗原與抗體反應)之間的差異。 陰性對照的基本組成也應該儘量與檢測樣本的組成一致,最好先行檢測確定其中不含待檢物質。比如,檢測人血清標本時,陰性陽性對照同陰性對照,只是採用「精選」的含有待檢物質的人血清製備而成。

所謂「精選」,就是把收集的陽性人血清經過數種試驗進行「篩試」、把含有「干擾性物質」的血清剔除、不用,以避免出現「假陽性」干擾試驗結果。

陽性對照的基本組成應該儘量與檢測樣本的組成一致,一般陽性對照多以含蛋白保護劑的緩衝液為基質,加入一定量的待檢物質。比如,以人血清為標本的測定,陽性對照多用確定的病人血清或者以復鈣人血漿為原料加入一定量標準品。僅供參考

用雙抗夾心elisa法做hcv檢測時 空白對照結果明顯大於陰性結果,為什麼啊

5樓:匿名使用者

如果你說bai的空白指的

是blank +底物》陰性du標本,應該是該孔zhi被汙染。dao

如果你說的空白指專的是屬blank+酶》陰性標本,有兩種可能,一種為該孔汙染,一種為你的酶標抗原或二抗(如果你檢測的hcv抗體)與你的包被原料有交叉反應且你的板封閉效果不好,而你加入陰性標本後37度反應30min—60min?的時間裡陰性血清相當於第二次封閉所以可使其n+e

6樓:望嶽者

你說的大於是怎麼個意思呀?

農業部規定的LB ELISA檢測的抗體效價不得低於多少

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