用高效液相色譜法測定氨基酸時為什麼要進行氨基酸的衍生

2022-11-20 08:16:18 字數 1075 閱讀 6687

1樓:好好往下過

建立一種準確、快速柱前衍生高效液相色譜法測定腦卒中患者血清 中18種遊離氨基酸的方法,為臨床**腦卒中提供依據.方法:利用高效液相色譜二極體陣列檢測法對aqc衍生的氨基酸產物進行分離.

採用thermo c18(250mm×4.6mm,5μm)色譜柱,ph 5.09的乙酸銨溶液和60%的乙腈水溶液為流動相,檢測波長248nm,利用梯度洗脫的方式測定血清中1 8種氨基酸.

結果:谷氨醯胺在0.0125-2mmol/l濃度範圍內,胱氨酸在0.

00625-0.25mmol/l濃度範圍內,其餘16種氨基酸在 0.0 125-0.

5mmol/l濃度範圍內線性關係良好.r2為0.9907-0.

9999,rsd為1-4%.結論:利用此方法可以檢測缺血性腦卒中患者血 清中游離氨基酸,測定結果準確可靠,方法簡單易行.

2樓:千葉雅之

很簡單,因為氨基酸沒有紫外吸收,如果不做衍生的話,你的檢測器根本就檢測不到色譜峰。

衍生其實就是,讓你的樣品溶液和衍生試劑反應,這樣氨基酸在混合過程中就會發生變化,變成有紫外吸收的物質,然後通過檢測器就可以測出來了。

怎麼用液相分離氨基酸啊,不用衍生化方法的,求大神

3樓:匿名使用者

如果是兩個氨基酸的保留時間距離太近,那麼只能調整液相條件了。比如調整流動相比例,或者是梯度比例,把兩個氨基酸拉開。

也可以適當調整衍生程式。雖然衍生程式不會對氨基酸的保留時間有影響,不過會對它的訊號產生影響。如果這兩種氨基酸的峰高有所下降,或許分離度也可以達到要求。

還有就是注意峰型。衍生化程式很容易損壞色譜柱,超高效色譜的壓力又高,色譜柱很容易損毀。如果峰型不好,建議用純乙腈低流速反衝色譜柱。或者是更換新色譜柱。

4樓:千葉雅之

我沒聽說過不用衍生可以測定氨基酸的液相方法。

首先就是氨基酸根本沒有紫外吸收啊,如果不用衍生你怎麼測定呢?衍生肯定是不穩定,畢竟衍生試劑是有活性的,所以精密度試驗特別差,這個是沒辦法的事情。

或者你考慮藥典的滴定方法吧,那個可以測出來,不過得一個氨基酸一個氨基酸來測。

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