1樓:再回首恍然銣夢
和marker平齊的是完整質粒,後面的應該是開環dna,整體挺清楚的,也沒有滯後或者拖尾的現象但是1和2亮度明顯低證明質粒的量比3和4少。
2樓:網友
拖尾嚴重的話說明質粒有降解,形成不同大小的片段,條帶特異性差。
3樓:溫鈍
1濃度過高無法正常電壓。2提取過程因為某些因素使dna降解。
4樓:我沒去過的地方
質粒dna提取不一定每次都有三條帶。
線狀dna和開鏈環狀dna的條帶經常是連在一起的。
技術高的人做出的質粒只有一條超螺旋帶。
鹼裂解法提出的質粒dna電泳圖有兩條帶,跑的慢的那個是什麼?
5樓:安吉吉的芹菜
不知道你提的質粒應該是多大的?提取到的質粒可能出現三條帶,最前面的是雙鏈閉合環狀的,其次是線狀的,最後面的是會出現一些複製中間體。感覺的帶跟中的任何一條都不同,如果24是酶切後的線性條帶,那3前面那條和1就是閉環的,3後面的是複製中間體。
後面的帶'號的是什麼?
請問質粒dna電泳的三條帶各是什麼?
6樓:諾諾百科
正常質粒是閉合的雙鏈dna。在電泳過程中可能使質粒發生開環,或者由開環解開螺旋變成線形。這三種形態電泳時的分離率不同,分離速度不同,分成三帶。
閉環(超螺旋),開環,線形的螺旋率依次降低。
質粒dna原則上是一條帶,但通常跑膠會看到三條,這是正常情況。因為質粒是環形的dna,稍有降解就會變成一條為線性,再厲害些,就成了線性dna,三者在瓊脂糖凝膠中速率不同,自然會出現三條帶。
7樓:網友
質粒dna電泳的三條帶質粒是細胞內的一種環狀的小分子dna,是進行dna重組的常用載體。作為乙個具有自身複製起點的複製單位獨立於細胞的主染色體之外,質粒dna上攜帶了部分的基因資訊,經過基因表達後使其宿主細胞表現相應的性狀。
在dna重組中,質粒或經過改造後的質粒載體可通過連線外源基因構成重組體。從宿主細胞中提取質粒dna,是dna重組技術中最基礎的實驗技能。
分離質粒dna,培養細菌使質粒擴增。收集和裂解細菌。分離和純化質粒dna鹼裂解法是較常用的提取的方法。
其優點是得率高,適合於大多數的和菌株,所得產物經純化後可滿足多數的dna重組操作。此法採取酸鹼度高達的鹼溶液使dna發生變性。
由於質粒和主染色體的拓撲結構不同,變性時前者雖然兩條鏈分離,但仍然纏繞在一起不分開;而後者完全變性分,甚至出現斷裂。因此,當加入中和液時,溶液ph值恢復較低的近中性水平,此時,質粒的兩條小分子單鏈可迅速復性,恢復雙鏈結構,但是主染色體dna則無法復性。
在離心時,大部分主染色體與細胞碎片,雜質等纏繞一起被沉澱,而可溶性的質粒dna留在上清夜中。在質粒提取過程中,由於機械力、酸鹼度、試劑等的原因,可能使質粒dna鏈發生斷裂。所以,多數質粒粗提取物中含有三種構型的質粒:
共價閉合環狀dna(cccdna):質粒的兩條鏈沒有斷裂;
鹼裂解法提取質粒dna的電泳圖譜,為何我的只有兩條帶?分別都是什麼?
8樓:兵兵王
1)選擇分子量 跟你的質粒接近的marker,最理想的是包含質粒分子量在內,但據我所知沒有這樣的marker。
2)你這個電泳圖上樣量太大了,一方面條帶不整齊難以判斷,另一方面你幹嘛要糾結於幾條帶呢?一般說是3條帶也是理論上的,但實際上,在菌體內複製的質粒就是乙個連續的狀態,什麼樣都有,電泳結果就可能造成條帶的區域性塗布。
所謂的三條帶解釋沒有定論,現在一般認為是超螺旋、複製型(處於複製的半開環狀態,即眼結構)和開環dna(一條鏈斷了),早先認為的 線狀dna後來被否,因為質粒很不容易斷裂成線狀的。順序應該是超螺旋在最前邊,開環在後邊。
憑經驗,我估計你的超螺旋和複製型合併成你那個粗的塗抹帶了,後邊那個細的是少量的開環dna。
鹼裂解法提取的質粒dna瓊脂糖凝膠電泳應該是什麼樣的?
9樓:北京索萊寶科技****
一般都有3條帶。據推測跑在最前邊的是cccdna(共價閉合環),中間的是oc(開環),最後的有點拖帶,稍寬,早期多認為是線狀的,但後來專家認為斷鏈質粒發生幾率很低,形不成條帶,因此現在一般認為是處於複製過程中的倍左右的條帶。(僅供參考)
10樓:網友
提的好的話會是一條單一的條帶,是超螺旋結構。有時會是兩條帶或三條帶,就要看提的質量了。
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