1樓：網友
將pcr產物凝膠電泳，切割**dna長度近似的條帶（凝膠**），將**提純的dna轉殖至質粒載體（先酶切再連線），將載體轉化至細菌擴增，提取質粒，利用質粒上已知序列作為因為對目的dna測序，利用blast比對測序產物與老鼠基因的近似性。這是基因工程的一般通用步驟。
綜合成本及效率，測序最為省力。當然，你也可以用特異性酶切位點做乙個基本判斷，如果基因的同源性很高，可以不用測序。 例如，老鼠基因上有乙個酶切位點，如果這段基因於人類的非常相似，用該限制性內切酶切人類基因也可以得到與切老鼠基因相同的效果。
2樓：網友
首先你可以跑一下電泳，看看有沒有目的條帶，看看目的條帶和你設計的引物的目的條帶的大小是不是一樣的，當然一樣也不一定代表絕對是，最好的辦法是直接測序，然後再進行序列比對。
3樓：網友
拿到ncbi 資料庫裡面blast一下就ok，物種選human genomic plus transcript
如何鑑定乙個基因是否是自己轉殖的基因
4樓：逛街老鼠人人豬
首先查閱文獻看該種基因在何種組織中表達較高，並確定打算用何種載體在何種細胞中表達，根據載體上的酶切位點設計併合成pcr引物（5』端要用酶切位點修飾），然後提取該組織進行rt-pcr，將擴出的條帶膠**並測序，如果測序正確，則將pcr產物與載體一併酶切，然後將基因連入載體並轉化入細菌，提取質粒，將提取的質粒轉入細胞，用elisa測細胞上清中的蛋白，裂解細胞用rt-pcr擴增該基因，用westernblot檢測細胞中蛋白的表達，用組化染色標記該細胞，以驗證基因是否轉入細胞並在細胞中表達，以上這些成功後就可做功能的研究。
轉殖是英文"clone"或"cloning"的音譯，而英文"clone"則起源於希臘文"klone"，原意是指以幼苗或嫩枝插條，以無性繁殖或營養繁殖的方式培育植物，如扦插和嫁接。在大陸譯為「無性繁殖」，在臺灣與港澳一般意譯為複製，轉殖或群殖。 中文也有更加確切的詞表達轉殖，「無性繁殖」、「無性系化」以及「純系化」。
轉殖是指生物體通過體細胞進行的無性繁殖，以及由無性繁殖形成的基因型完全相同的後代個體組成的種群。通常是利用生物技術由無性生殖產生與原個體有完全相同基因的個體或種群。
以上資源來自清華大學生命科學院研究報告】
轉錄組測序得到的序列，想把乙個基因轉殖出來，但是不知道序列是不是完整，怎麼確定是否完整呢
5樓：須諾
貌似是有乙個全長的轉錄本資料庫，可以比對一下，確定是否是全長序列。
我想轉殖乙個基因。步驟是：先進行pcr，pcr產物純化**，然後連線，轉化，一直不成功。**的片段很亮。
6樓：養你過年吃肉
你也是bai老手了，300bp的片段du連線也是小意思，基本的問zhi題就不談了。
dao：1，不成內功是怎麼不成功，容假陽性？如果是這樣，多挑點（20個）鑑定2，試試培養基中加1%葡萄糖，以及將片段末端磷酸化試試，都能提高連線和轉化效率。
我覺得，片段與載體比例不是根本原因，300bp很好連，而且是t載體，就算比例比較誇張，對你這樣的老手也不會轉不出陽性。如果你的片段有酶切位點，直接酶切連目標載體試試。
7樓：
1，目的片斷是否過長？
2，使用的t 載體和連線時間，一般要溫度是當低一點，時間長一些。
8樓：網友
是不是應該對你的序列本身進行一下分析呢？有些序列本身很特別就不能按照常規的程式拉。
pcr技術是怎樣讓dna快速複製的?
9樓：life六耳
pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：①模板dna的變性：模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板dna與引物的退火（復性）：
模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合；③引物的延伸：dna模板--引物結合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基互補配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈，重複迴圈變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」，而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成乙個迴圈需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。望採納。
如何用pcr技術轉殖和改造目的基因
10樓：網友
大學作業？你是有多懶。
既然目的基因可以用dna文庫篩選，pcr等方法獲取，那為什麼還要匯入轉殖載體進行目的基因的複製？
11樓：刀劍信譽
下列獲取目的基因的方法中需要模板鏈的是。
從基。因組文庫中獲取目的內基容因 ② 利用pcr技術擴增目的基因③ 反轉錄法 ④ 通過dna合成儀利用化學方法人工合成。
a. ②b. ①
c. ②d. ①答案a
12樓：網友
我猜測是不是含量太低，需要擴增。
如何確定這個是否是我要的目的基因序列？
13樓：網友
然後你就構建重組子，再大腸桿菌中表達，看看目的產物的變化。
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