求細胞週期檢測方法 PI法操作步驟

2021-05-20 04:41:27 字數 1739 閱讀 7718

1樓:匿名使用者

1. 細胞培養:取對數生長期的細胞,按1×106cells/ ml以1ml接種24孔板或2ml接種於6孔板內,進行所需的回處理(比如加入藥答物),特定時間後終止培養,進行下一步的實驗。

2. 細胞固定: 800rpm離心5min,收集細胞沉澱,棄上清,用預冷pbs洗滌兩次,加入預冷75%乙醇,於4℃固定4h以上。

3. 細胞染色:1500rpm離心5min,棄上清,以3ml的pbs洗滌一次,加入400ul溴化乙錠(pi,50ug/ml),100ul rnase a(100ug/ml ),4℃避光孵育30min。

4. 流式分析: 以標準程式用流式細胞儀檢測,一般計數2~3萬個細胞,結果用細胞週期擬和軟體modfit分析。

細胞週期是指能持續**的真核細胞從一次有絲**結束後生長,再到下一次**結束的迴圈過程。細胞週期的長短反映了細胞所處狀態,這是一個細胞物質積累與細胞**的迴圈過程。癌變的細胞以及特定階段的胚胎細胞常常有異常的**週期。

2樓:匿名使用者

1、 0.25%胰酶(無edta)消來化,將細胞消化成單源個。(必須消化成單個)。

2、離心收集細胞,棄上清,用預冷pbs洗細胞兩次(加3ml,吹懸,離心,棄上清算洗一次)。

3、加入3ml預冷(-20度)70%乙醇到細胞沉澱中,於4度固定過夜(或者,如果實驗週期長可以-20℃長期固定)。

4、離心收集細胞,以3ml的pbs洗細胞兩次,加入500ulpbs含50ug/ml溴化乙錠(pi),100ug/ml rnase a, 0.2% triton x-100, 4℃避光孵育30分鐘。

5、送實驗室,上機

3樓:周婷金偉

1、 0.25%胰酶(無baiedta)消化,將du

細胞消化成zhi單個。(必須消化成單個)。2、離心dao收集細胞,棄上清,專用預冷pbs洗細胞兩次(屬加3ml,吹懸,離心,棄上清算洗一次)。

3、加入3ml預冷(-20度)70%乙醇到細胞沉澱中,於4度固定過夜(或者,如果實驗週期長可以-20℃長期固定)。4、離心收集細胞,以3ml的pbs洗細胞兩次,加入500ulpbs含50ug/ml溴化乙錠(pi),100ug/ml rnase a, 0.2% triton x-100, 4℃避光孵育30分鐘(pi我是直接用pbs配成工作濃度,然後加入細胞沉澱混勻,rna酶現加,但有時不加發現對實驗結果也沒太大的影響)。

5、送6樓中心實驗室,上機

細胞週期檢測方法即pi法的操作步驟

4樓:匿名使用者

1. 細胞培養:取對數bai生長期的du細胞,按1×106cells/ ml以1ml接種zhi24孔板或2ml接種於6孔板內,進dao行所需的處理(

版比如加入藥物),特定時權間後終止培養,進行下一步的實驗。

2. 細胞固定: 800rpm離心5min,收集細胞沉澱,棄上清,用預冷pbs洗滌兩次,加入預冷75%乙醇,於4℃固定4h以上。

3. 細胞染色:1500rpm離心5min,棄上清,以3ml的pbs洗滌一次,加入400ul溴化乙錠(pi,50ug/ml),100ul rnase a(100ug/ml ),4℃避光孵育30min。

4. 流式分析: 以標準程式用流式細胞儀檢測,一般計數2~3萬個細胞,結果用細胞週期擬和軟體modfit分析。

細胞週期是指能持續**的真核細胞從一次有絲**結束後生長,再到下一次**結束的迴圈過程。細胞週期的長短反映了細胞所處狀態,這是一個細胞物質積累與細胞**的迴圈過程。癌變的細胞以及特定階段的胚胎細胞常常有異常的**週期。

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