1樓：匿名使用者
ste：破壞細胞膜、核膜,分散好的真核生物組織、細胞在含sds和蛋白酶k的溶液中消化分解蛋白質
sds：可使組織蛋白與dna分子分離
edta：能抑制細胞中dnase的活性，使dna分子完整地以可溶形式存在於溶液中
酚：抽提除去蛋白質
氯仿：除去dna溶液中微量酚的汙染
異戊醇：可減少蛋白質變性操作過程中產生氣泡乙醇：dna可經乙醇沉澱
rnase：除去rna，進一步純化dna，獲得高純度dna
2樓：匿名使用者
主要成分是：nacl，tris-hcl（ph=8），edta（ph=8），sds。nacl，tris-hcl主要是調節溶液的ph，維持一定的離子濃度。
edta主要是二價金屬離子的螯合劑，使影響dna的dna酶中的鈣離子和鎂離子和edta結合，使酶失去活性，有利於提取完整dna；sds主要是和蛋白質結合，使其變形沉澱，從而利於dna的提取，減少和清除帶白質雜質！
基因組dna製備過程中提取緩衝液有哪些成分，作用是什麼
3樓：匿名使用者
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4樓：北京索萊寶科技****
主要成分是：nacl,tris-hcl（ph=8）,edta（ph=8）,sds.nacl,tris-hcl主要是調節溶液的ph,維持一定的離子濃度.
edta主要是二價金屬離子的螯合劑,使影響dna的dna酶中的鈣離子和鎂離子和edta結合,使酶失去活性,有利於提取完整dna；sds主要是和蛋白質結合,使其變形沉澱,從而利於dna的提取,減少和清除帶白質雜質!
基因組dna製備過程中提取緩衝液有哪些成分，作用是什麼
5樓：鞠翠花喻書
主要成分是：nacl，tris-hcl（ph=8），edta（ph=8），sds。nacl，tris-hcl主要是調節溶液的ph，維持一定的離子濃度。
edta主要是二價金屬離子的螯合劑，使影響dna的dna酶中的鈣離子和鎂離子和edta結合，使酶失去活性，有利於提取完整dna；sds主要是和蛋白質結合，使其變形沉澱，從而利於dna的提取，減少和清除帶白質雜質！
在基因組dna的提取過程中應注意哪些問題
6樓：匿名使用者
1、 裂解液要預熱,以抑制dnase,加速蛋白變性,促進dna溶解.
2、 酚一定要鹼平衡.苯酚具有高度腐蝕性,飛濺到**、粘膜和眼睛會造成損傷,因此應注意防護.氯仿易燃、易爆、易揮發,具有神經毒作用,操作時應注意防護.
3、 各操作步驟要輕柔,儘量減少dna的人為降解.
4、 取各上清時,不應貪多,以防非核酸類成分干擾.
5、 異丙醇,乙醇.naac,kac等要預冷,以減少dna的降解,促進dna與蛋白等的分相及dna沉澱.
6、 提取dna過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤乾等辦法進行無核酸酶化處理.
7、 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配製.
基因組dna製備過程中提取緩衝液有哪些成分，作用是什麼
7樓：長春北方化工灌裝裝置股份****
主要成分是：nacl,tris-hcl（ph=8）,edta（ph=8）,sds.nacl,tris-hcl主要是調節溶液的ph,維持一定的離子濃度.
edta主要是二價金屬離子的螯合劑,使影響dna的dna酶中的鈣離子和鎂離子和edta結合,使酶失去活性,有利於提取完整dna；sds主要是和蛋白質結合,使其變形沉澱,從而利於dna的提取,減少和清除帶白質雜質!
75%乙醇，在植物基因組dna的提取試驗中什麼作用
8樓：匿名使用者
同物（植物、物、微物）基組dna提取所同; 同種類或同種類同組織其細胞結構及所含同離差
異提取某種特殊組織dna必須參照文獻經驗建立相應提取, 獲用dna尤其組織糖酶類物質隨酶切、pcr反應等較強抑制作用,用富含類物質材料提取基組dna, 應考慮除糖酚類物質
本實驗水稻幼苗材料,習基組dna提取般
dna、材料
水稻幼苗
二、裝置
移液器冷凍高速離機臺式高速離機水浴鍋陶瓷研缽50ml離 管（蓋）及5ml1.5ml離管彎鉤狀玻棒
三、試劑
1、提取緩衝液?：100mmol/l tris?cl, ph8.0, 20mmol/l edta, 500mmol/l
nacl, 1.5% sds
2、提取緩衝液?：18.6g葡萄糖6.9g二乙基二硫代碳酸鈉6.0gpvp240ul巰基乙醇加水至300ml
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇
4、 rnasea母液：配見第章
5、其試劑：液氮、異丙醇、te緩衝液水乙醇、70%乙醇、3mol/l naac
四、操作步驟：
（）水稻幼苗或其禾木科植物基組dna提取
1. 50ml離管加入20ml提取緩衝液?, 60?水浴預熱
2. 水稻幼苗或葉5-10g, 剪碎, 研缽加液氮磨粉狀立即倒入預熱
離管, 劇烈搖混勻, 60?水浴保溫30-60鍾(間,dna產量高), 搖
3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 顛倒混勻(需帶手套, 防止損傷**)室溫靜置5-10鍾, 使水相機相層(必要重新混勻)
4. 室溫5000rpm離5鍾
5. 仔細移取清液至另50ml離管,加入1倍體積異丙醇,混勻,室溫放置片刻即現絮狀dna沉澱
6. 1.5ml eppendorf加入1ml te用鉤狀玻璃棒撈dna絮團,乾淨吸水紙吸乾,轉入含te離管,dna快溶解於te
7. dna形絮狀沉澱,則用5000rpm離5鍾, 再沉澱移入te管收集沉澱,往往難溶解於te,60?水浴放置15鍾幫助溶解
8. dna溶液3000rpm離5鍾, 清液倒入乾淨5ml離管
9. 加入5μl rnasea(10μg/μl), 37? 10鍾, 除rna(rnadna操作、析般影響省略該步驟）
10. 加入1/10體積3mol/l naac及2×體積冰乙醇,混勻,-20?放置20鐘左右,dna形絮狀沉澱
植物基因組dna提取實驗中液氮的作用是什麼？
9樓：匿名使用者
對樣品進行急凍，使樣品變硬，變脆，這樣可以保證研磨的時候能夠充分，均勻，dna釋放更充分。
另外，提供一個相對低溫的環境，對保證樣品的穩定性也有幫助。
動物組織提取基因組dna的步驟和試劑
10樓：
一、實驗原理
真核生物的一切有核細胞（包括培養細胞）都能用來製備基因組 dna。真核生物的dna是以染色體的形式存在於細胞核內，因此，製備dna的原則是既要將dna與蛋白質、脂類和糖類等分離，又要保持dna分子的完整。提取dna的一般過程是將分散好的組織細胞在含sds（十二烷基硫酸鈉）和蛋白酶k的溶液中消化分解蛋白質，再用酚和氯仿/異戊醇抽提分離蛋白質，得到的dna溶液經乙醇沉澱使dna從溶液中析出。
蛋白酶k的重要特性是能在sds和edta（乙二胺四乙酸二鈉）存在下保持很高的活性。在勻漿後提取dna的反應體系中，sds可破壞細胞膜、核膜，並使組織蛋白與dna分離，edta則抑制細胞中dnase的活性；而蛋白酶k可將蛋白質降解成小肽或氨基酸，使dna分子完整地分離出來。
二、儀器及試劑
1. 儀器：
恆溫水浴鍋、臺式離心機、紫外分光光度計（genequant）、移液器、玻璃勻漿器、離心管（滅菌）、吸頭（滅菌）
2. 試劑：
（1）細胞裂解緩衝液：
tris (ph8.0) 100 mmol/l
edta (ph 8.0) 500 mmol/l
nacl 20 mmol/l
sds 10%
胰rna酶 20ug/ml
（2）蛋白酶k：稱取20mg蛋白酶k溶於1ml滅菌的雙蒸水中，?c20℃備用。
（3）te緩衝液（ph 8.0）：高壓滅菌，室溫貯存。
（4）酚：氯仿：異戊醇（25:24:1）、
（5）異丙醇、冷無水乙醇、70%乙醇、滅菌水。
三、操作步驟
1. 取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g（0.
5cm3），儘量剪碎。置於玻璃勻漿器中，加入1ml的細胞裂解緩衝液勻漿至不見組織塊，轉入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶k （500ug/ml）20μl，混勻。
在65℃恆溫水浴鍋中水浴30min，也可轉入37℃水浴12～24h，間歇振盪離心管數次。於臺式離心機以12000 rpm離心5min，取上清液入另一離心管中。
2.加2倍體積異丙醇，倒轉混勻後，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼幹，用200ul te 重新溶解。（可進行pcr反應等，需要進一步純化的按下列步驟進行）
3.加等量的酚：氯仿：異戊醇振盪混勻，離心12000 rpm，5min。
4.取上層溶液至另一管，加入等體積的氯仿?異戊醇，振盪混勻，離心12000 rpm，5min。
5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/l乙酸氨加入2倍體積的無水乙醇，混勻後室溫沉澱2min ，離心12000 rpm ,10min。
6.小心倒掉上清液，將離心管倒置於吸水紙上，將附於管壁的殘餘液滴除掉。
7.用1ml 70%乙醇洗滌沉澱物1次，離心12000 rpm ， 5min。
8.小心倒掉上清液，將離心管倒置於吸水紙上，將附於管壁的殘餘液滴除掉，室溫乾燥。
9.加200ul te重新溶解沉澱物，然後置於4℃或?c20℃儲存備用。
10.吸取適量樣品於genequant上檢測濃度和純度。
四、常見問題
1.選擇的實驗材料要新鮮，處理時間不易過長。
2.在加入細胞裂解緩衝液前，細胞必須均勻分散，以減少dna團塊形成。
3. 提取的dna不易溶解：不純，含雜質較多；加溶解液太少使濃度過大。沉澱物太乾燥，也將使溶解變得很困難。
4. 電泳檢測時dna成塗布狀：操作不慎；汙染核酸酶等。
5.分光光度分析dna的a280/a260小於1.8；不純，含有蛋白質等雜質。在這種情況下，應加入sds至終濃度為0.5%，並重復步驟2～8。
6.酚/氯仿/異戊醇抽提後，其上清液太黏不易吸取：含高濃度的dna，可加大抽提前緩衝液的量或減少所取組織的量。
dna測序為什麼要測整個基因組,DNA測序為什麼要測整個基因組
在基因組研究領域,人們對資料的可信度有一個基本的要求 單個鹼基越準確越好,對單個鹼基的覆蓋深度越多倍越好,對整個基因組測得越完整越好,測序的 缺口 gap 越少越好。新一代測序中,基因從頭測序和重測序有什麼區別?我要做乙肝病毒dna全長測序,應該選用哪種方法?1 條件不同 從頭測序的條件是不依賴於任...
酵母基因組DNA一般有多大電泳時大概在那個範圍
1200萬bp 一般基因組dna提取時會斷裂成15kb的片段。這個如果bai你用普通的電泳可能沒 du法檢測zhi 太大的基本組。一萬以 dao上的和100萬的在專一般的電泳時,屬速度差別不太大 象dl15000的dna marker,後面兩條帶跑得很近 想比較準確的判斷的話,可以用脈衝電泳。當然,...
從基因組文庫中獲取目的基因需用限制酶嗎
如果文庫已經構建好了就不需要限制酶了,直接用引物擴增就可以 當然,如果想再將該基因匯入受體細胞的過程中需要構建表達載體,這就需要限制酶了。需要的,要限制性核酸內切酶切取相應的目的基因片段 為什麼從基因文庫中獲取目的基因不需要限制性核酸內切酶?基因文庫儲存的是已經被切割好的含有生物不同基因的dn 段,...