1樓：匿名使用者
用trizol來提取細胞總rna的話，一個6孔板的細胞足夠了。對於貼壁培養的細胞，可將培養基吸出後直接向培養板中加入trizol來溶解細胞，然後分次移出細胞裂解物進行後續操作即可。值得注意的是，對於所加trizol的量，是依據培養板的面積而不是依據細胞的數量來決定用量的（一般每10cm2加1 ml）。
當trizol量不足時可導致抽提的rna中汙染有dna。
另外，在trizol的使用說明中的注意事項提及，如果細胞量太少（100~10000個細胞），可加入800 ul的trizol，後續裂解、加氯仿按常規操作。在用異丙醇沉澱rna前加入5-10 ug無rna酶的糖原作為水相的載體。其會保留在水相，與rna共沉澱，且不影響後續的逆轉錄及pcr反應。
2樓：匿名使用者
這一從培養的單層哺乳動物細胞中分離 rna
3樓：小乖乖小鬧鬧
對於貼壁培養的細胞，可將培養基吸出後直接向培養板中加入trizol來溶解細胞，然後分次移出細胞裂解物進行後續操作即可，一般個人習慣用biog提取
rna干擾技術和反義核酸技術哪個的基因沉默
做轉錄組，組織樣本和細胞樣本哪個更好
rna的干擾原理
4樓：丕龍兄
1、病毒基因
、人工轉入基因、轉座子等外源性基因隨機整合到宿主細胞基因組內，並回利用宿主細答胞進行轉錄時，常產生一些dsrna。至於dsrna的產生機制我也沒搞懂。
2、宿主細胞對這些異樣的dsrna產生反應，核酸內切酶dicer將dsrna切割成多個具有特定長度和結構的小片段rna（大約21～23 bp），即sirna。
3、sirna在細胞內rna解旋酶的作用下解鏈成正義鏈和反義鏈，反義sirna再與體內一些酶(包括內切酶、外切酶、解旋酶等)結合形成rna誘導的沉默複合物(rna-induced silencing complex，risc)。
4、risc與外源性基因表達的mrna的同源區進行特異性結合，risc具有核酸酶的功能，在結合部位的兩端切割mrna，使mrna降解。
5、sirna還可作為引物與mrna結合併在rna聚合酶(rna-dependent rna polymerase，rdrp)作用下合成更多新的dsrna，新合成的dsrna再由dicer切割產生大量的次級sirna，從而使rnai的作用進一步放大，最終將靶mrna完全降解。
6、達到基因沉默的目的。
回答完畢。
5樓：匿名使用者
rna干擾(rnai)指的是，將與mrna對應的正義rna和反義rna組成的雙鏈rna(dsrna)匯入細胞，可以使mrna發生特異性的降解，導致其相應的基因沉默的現象。
6樓：匿名使用者
細胞由於進化的機理，有一套降解雙鏈rna的酶系統（抗病毒感染）。
rnai就是利用這一專系統，人工引屬入一段和目標rna互補的序列，這樣，在細胞內形成雙鏈rna，誘發降解機制。使目標rna降解，無法被進一步翻譯了。
7樓：匿名使用者
問的不具體
應該都是干擾其合成。
提取細胞rna一個培養皿加多少trizol
8樓：北京索萊寶科技****
（僅供參考）1ml就可以了，細胞的rna提取比較容易，只要你提取過程能夠保證不汙染，rna一般不會降解，質量也應該不錯。如果要使濃度高一點，你可以稀釋的時候少加點depc水，我不知道你是多少水稀釋的，可以減少一下。
9樓：匡雅霜
從12孔板到6cm dish，我都加1ml trizol。
其餘多少可酌情增減。trizol的說明書上有按細胞量多少來加的，你要求高的話自己仔細看看。
rna提取原理
10樓：追尋複製者
rna抽取一般使用trizol法抽來提:
trizol是一種總自rna抽提試劑，內含異bai硫氰酸胍等物質，能du
迅速裂解細zhi胞，抑制細胞釋
dao放出的核酸酶活性。目前常用trizol法進行提取組織或細胞中的rna。
trizol作用原理:
在勻質化或溶解樣品中，trizol試劑可保持rna的完整性，同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心後，裂解液分層成水相和有機相。rna存在於水相中。
水相轉移後，rna通過異丙醇沉澱**。移去水相後，用乙醇可從中間相沉澱得到dna，加入異丙醇沉澱可從有機相得到蛋白質。
11樓：匿名使用者
dna不是單獨存在於細胞中的，是染色體
蛋白質是有機物沒錯，但是它是複雜的有機物，有親水基，疏水基，所以不是只要是有機物就溶於有機溶劑的
分層看的是密度，不是分子量的大小
12樓：《不能說的祕密
蛋白質在有機溶劑中復變性所以形成
制沉澱，中間那白bai色的是變性du的蛋白質。
我們做過zhi提取dna的實驗，dao用的是飽和酚提取的，後來又用了氯仿的。dna、rna很容易被分解，特別是rna，rna酶到處都有，我們在做dna提取時用到edta抑制dna酶的活性，防止被降解。
分層不是看分子的大小的，看它在離心力的作用下運動的快慢，一般密度大的運動的快一些在下面。
下層有機相中有一些脂類
trizol裂解細胞後可以按照rna提取試劑盒提取嗎
13樓：名傑**
總rna提取試劑盒（trizol法）
ripure試劑是直接從細胞或組織中提取總rna的試劑。它在破碎和溶解細胞時能保持rna的完整性。加入氯仿後離心，樣品分成水樣層和有機層。
rna存在於水樣層中。收集上面的的水樣層後，rna可以通過異丙醇沉澱來還原。在除去水樣層後，樣品中的dna和蛋白也能相繼以沉澱的方式還原。
乙醇沉澱能析出中間層的dna，在有機層中加入異丙醇能沉澱出蛋白。共純化dna對於樣品間標準化rna的產量十分有用。
無論是人、動物、植物還是細菌組織，該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細胞(>107)均有較好的分離效果。tripure試劑操作上的簡單性允許同時處理多個的樣品。所有的操作可以在一小時內完成。
tripure抽提的總rna能夠避免dna和蛋白的汙染。故而能夠作rna印跡分析、斑點雜交、poly(a)+選擇、體外翻譯、rna酶保護分析和分子克隆。如果是用於pcr，當兩條引物位於單一外顯子內時，建議用擴增級的dnase i來處理抽提的總rna。
tripure試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種rna的析出。例如，從大鼠肝臟抽提的rna瓊脂糖凝膠電泳並用溴化乙啶染色，可見許多介於7 kb和15 kb之間不連續的高分子量條帶(mrna和hnrna成分)，兩條優勢核糖體~5 kb (28s)和~2 kb(18s)，低分子量rna介於0.1和0.
3 kb之間 (trna, 5s)。當抽提的rna用te稀釋時其a260/a280比值≥1.8。
適用範圍：
適用於各種動植物組織/細胞總rna、dna、蛋白的快速抽提用杭州昊鑫生物的
14樓：匿名使用者
先加rna抑制劑，然後冰上提取，操作儘量快。
這個公司，武漢勤致傑生物，我用了。根本提不出來，全降解了，付錢之前騙人說多好用，售後的時候態度超級差，毀我樣本，給我氣收。
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