1樓：析看
如果質粒重新轉化到大腸桿菌中之後，進行質粒酶切時沒有得到預期的結果，則可能有以鬥臘下原因：
1. 酶切反應不完全或者酶切時間過長，導致質粒被過度酶解，甚至被完全水解，不再具備克正銷型隆載體的功能。
2. 酶切條件不適合所使用的限制性內切酶，如酶切緩衝液ph值不對、溫度不恰當、酶切輔助試劑新增不正確等。
3. 質粒可能出現重組或突變現象，導致其不再與酶切位點匹配或者酶切位點消失。
4. 質粒提取或轉化舉猜時出現問題，如質粒提取不純或者轉化時細胞密度不夠等。
因此，在進行質粒酶切時應該仔細檢查酶切條件及操作細節，並進行合適的對照實驗來確定其可靠性。
2樓：海朗可愛
質粒重新轉化大腸桿菌時，如果質粒經過酶切處理不正確，可能會導致轉化效率降低或者轉化失敗。常見的酶切不對的情況包括：
1. 酶切反應時間過長或過短，導致酶切不完全或者過度酶切。
2. 酶切緩衝液的ph值不正確，可能會影響酶的活性，導致酶切效果不佳。
3. 酶切反應溫度不正確，可能會影響酶的活性，導致酶切效果不佳。
4. 酶切酶的濃度不正確，可能會導致酶切效果不佳。
5. 酶切反應中存在抑制搜滑梁劑或者其他干擾因素，可能會讓散影響酶的活性，導致酶切效果不佳。
因此，在進行質粒重新轉化大腸桿菌之前，建議對質粒進行充分的酶切反應，並且注意酶切反應的時世運間、溫度、ph值、酶的濃度等因素，以確保酶切效果良好。
3樓：唄庇招聘
原因是提質粒的時候它們因為很短，自羨滲然不會被蛋白質細兄凳脊胞器基因組dna沉澱帶走，粗察最後和陰性質粒一起再接受pcr，所以出了假陽性。
4樓：網友
質虛者粒重新轉化後，使用質粒酶切進行篩選時需要使用正確的酶切酶和酶切緩衝液，否則可能無法正確篩選目標質粒或有誤篩選。需要仔細檢查酶切前後的質粒酶切位差派薯點以及酶切效率和酶切時間羨鬧等多個引數，以確保酶切的準確性和可重複性。同時，質粒酶切操作需要小心謹慎，避免質粒dna損傷或失活，影響下一步的實驗結果。
怎樣改造質粒，引入新的酶切位點
5樓：
答案是b。此題主要考查基因工程中有關限制酶、連線酶、粘性末端等知識。
d①圖2中獲得目的基因用2種不同的限制酶；②叢譁對「對質粒進行了改造，構建新的限制酶切位點」這句話的理解：在質粒中已有pstⅰ酶切位點，但沒有mseⅰ的酶切位點，但根據mseⅰ、ecorⅰ的識兄並別序列及切割位點可知，可對ecorⅰ識別序列進行改造，即通滲塵行過dna連線酶、dna聚合酶的作用，使ecorⅰ識別序列變為mseⅰ的識別序列。
關於重組質粒轉化的問題,關於重組質粒轉化的問題
好像是bai這麼回事 我當時du沒有認真聽zhi講 冷凍和cacl2使得dao 細胞膜變得脆 流動內性差 這時進行熱容擊過程容易使其出現孔洞,使得dna可以進到細胞裡。溫度是比較高的,時間長的話細胞容易死掉。我們當時做的是120秒 溫度低則效果不好。後一問不清楚。可能是特定的熱穩定dna聚合酶作用的...
質粒分離提取的主要原則有哪些？
實驗操作中，我們通常應用溶菌酶。和陰離子表面按活性劑sds 十二烷基磺酸鈉。來處理收集到的菌體。在溶菌酶的作用下，細菌的細胞壁。破裂並釋放出質粒。在這個狹窄的範圍內，線性染色體dna的雙螺旋會解開，質粒dna的氫鍵也會斷裂。然而，質粒dna的氫鍵雖然斷裂，但兩條鏈依然互補纏繞，緊密結合。在裂解過程中...
rna質粒的轉化實驗組無菌落的原因
原因很多 .培養基的問題。用確定可以長起來得菌測試一下，可以很快知道是否有問題。.確認抗性是否正確。.最可能的問題是連線衝旁高轉化失敗，這個問題也最難解決，涉及啟陵的小問題更多。先確認試驗設散尺計沒有問題，再確認酶切是否有問題，然後再確認連線過程是否符合規定。.如果確認上述問題都沒有，那就是另乙個問...