1樓:網友
有很多原因。如果目的條帶比較單一且沒有雜帶,說明迴圈數偏低,可以適當增加迴圈數;如果雜帶多,目的條帶看不清或者很弱,說明整個擴增體系或反應程式有問題,需要優化pcr體系和程式。
pcr產物條帶過寬的而且不清晰,marker條帶正常
2樓:網友
請問 你的dna是怎麼提取的 很可能是在提取過程中混有抑制pcr擴增的物質。
3樓:士誠小人也
嘗試一下提高退火溫度看看。
pcr產物電泳後為何條帶過寬,而且有的條帶清晰,有的則不清晰
4樓:網友
條帶過寬或者不清晰是因為dna被降解了,或者是凝膠沒做好。
pcr產物條帶很淡,是什麼原因
5樓:綠植東
濃度低,你可以多跑幾個迴圈試試,或者再坐的時候,加大加入基因的濃度。
pcr產物的電泳條帶不夠亮,為何?如何優化pcr反應體系
6樓:天空下的一顆塵
首先要看你的條帶是否清晰,雖然亮度不夠但是清晰度應該高,沒有拖尾沒有非特異條帶和引物二聚體,如果以上都沒有,僅僅是目標條帶不夠亮的話,我覺得。
你可以將25微公升體積同比放大至50微公升反應體系,相應的制膠的時候插孔槽用大梳子而不是小的那種。還有很重要的就是你的核酸染料是什麼?我用過幾種核酸染料感覺還是eb亮度最好,雖然毒性大了點。
如果條帶不夠亮,還有拖尾、非特異條帶、引物二聚體等問題,那就是你反應體系中需要優化。1、出現非特異擴增可能是你的引物設計上特異性差或者引物濃度過高,mg濃度或酶含量過高(適當改變mg濃度從1mm到3mm,間隔進行梯度試驗,或者酶含量改變按為間隔梯度試驗。)2、如果出現拖尾,,要考慮引物特異性和模板純度,另外迴圈數、退火溫度以及mg含量過高、dntp過多等也可能造成拖尾。
7樓:網友
可以適當降低tm溫度。
8樓:請個葵級話
加大反應體系和迴圈數。
pcr產物跑出來的條帶為什麼會這樣?不是一條特別細特別亮的帶
9樓:南京金益柏生物科技****
樣裡邊目的基因的濃度不同 在基因濃度低的情況下是很有可能產生條帶不良的,這是正常的和迴圈數是沒有關係的(沒過乙個迴圈dntp都會消耗,最終經過25+迴圈的pcr其產物擴增數都可認為是基本不會變化了)
各位朋友,pcr產物條帶很淡,是什麼原因
10樓:龍鳳油洺月
降低退火溫度,提高鎂離子濃度,增加迴圈數,提高模板量,增加酶用量。
古菌pcr陰性對照為什麼有條帶,古菌PCR陰性對照為什麼有條帶
說明引物有非特異性擴增。所以,當你的樣品中出現一模一樣的條帶的時候,要小心了,說明這條帶可能是非特異性擴增引起的。為什麼pcr陰性總有條帶出現 提高退火溫度,或重新設計引物,或者是陰性對照被汙染,當然還有其它好多小原因,要是還沒解決,請細說並追問。為什麼我的pcr陰性對照總是跑出陽性條帶 實驗室體系...
出來的條帶不清晰怎樣才能跑出來好看的條帶
這個跟引物好壞有很大關係,好的引物易與dna模板特異性結合,gc含量 tm值等也利於pcr擴增產物,不好的引物可能本身與dna結合就不夠緊密或者不能特異性結合,還有就是本身容易形成二聚體,擴增效率也不高,導致pcr產物量少甚至根本沒有,自然跑不出條帶 條帶清晰 英文怎麼說 條帶清晰 英文翻譯 cle...
為什麼可以利用t載體對pcr產物進行克隆
t克隆的原理是基於常規pcr反應中所使用taq聚合酶能夠在pcr產物的3 末端非特異版性新增一個a,這樣實際上 權常規pcr產物都含有3端突出一個a的粘性末端.基於這個原理,常規的線性t 克隆載體 puc18和puc19等 在其3 末端新增一個t,這樣的載體能夠和任何pcr產物進行連線克隆,並不需要...