用ctab方法制備植物dna的操作過程中應注意哪些事項

1樓：

1、裂解液要預熱，以抑制dnase,加速蛋白變性，促進dna溶解。

2、酚一定要鹼平衡。苯酚具有高度腐蝕性，飛濺到**、粘膜和眼睛會造成損傷，因此應注意防護。氯仿易燃、易爆、易揮發，具有神經毒作用，操作時應注意防護。

3、各操作步驟要輕柔，儘量減少dna的人為降解。

4、取各上清時，不應貪多，以防非核酸類成分干擾。

5、異丙醇，乙醇。naac,kac等要預冷，以減少dna的降解，促進dna與蛋白等的分相及dna沉澱。

6、提取dna過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤乾等辦法進行無核酸酶化處理。

7、所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配製。

3×ctab法提取植物dna的過程中為什麼要加

2樓：網友

翩翩《美景良辰》：不需盈門賓客，不需六證三媒，不需旦旦心誓，不需紅褂綠披，皓月中天，千燭交輝，兩心拳拳，八行喜淚，心犀既能通一點，花開並蒂形影隨。忘了柳巷煙花，忘了尋香買醉，忘了凡塵榮辱，忘了橫目詬啐。

月下手談，洞簫橫吹，美景良辰，琵琶聲脆，舊事之師當記取，白頭伴生死隨。

ctab提取植物dna中的問題

3樓：網友

酚當然取下層，上層油狀物是保護下層的酚用的。

離心好像沒什麼問題。

4樓：網友

tris飽和酚應該使用下層，上層是tris緩衝液，防氧化揮發的。

離心應該還ok了。

ctab法提取植物葉子dna，離心過程中對溫度的要求一定要是4度嗎？沒這個條件的話對dna的降解是不是影響很大

5樓：網友

最好是4度，沒有低溫冷凍離心機也沒關係，普通離心機室溫下也可以，少許的降解對一般實驗的影響並不大。dna純化過程中確實有一些小的細節，對dna的得率和純度影響比較大，如清洗的時候一定要溫和，清洗後溶解的時間也要合適等等。

6樓：網友

在蛋白質充分變性之前應為4度以防止dna的降解，在加入氯仿-異戊醇使蛋白質變性之後最好維持15度左右離心，不然的話ctab會因溫度過低而出現沉澱現象。

7樓：吉公尺公尺

都在室溫下操作，dna哪那麼容易降解？

請教：ctab法提取植物dna的問題

8樓：匿名使用者

提取植物dna常用的方法是ctab法。原理：ctab是一種陽離子去汙劑，具有從低離子強度溶液中沉澱核酸與酸性多聚糖的特性。

在高離子強度的溶液中(> nacl),ctab與蛋白質和多聚糖形成複合物，只是不能沉澱核酸。通過有機溶劑抽提，去除蛋白，多糖，酚類等雜質後加入乙醇沉澱即可使核酸分離出來。步驟如下：

1）取材料，加液氮研磨成粉末狀，迅速移入 ml eppendorf管中；

2）加入800 μl的ctab提取緩衝液，混勻（ctab在65℃水浴預熱）,每5min輕輕**幾次，20min後12000 r/min,離心15 min；

3）小心吸取上清液，加入等體積的酚：氯仿（各400μl）溶液，混勻，4℃,12000 r/min,離心10 min；

4）小心吸取上清液，加入等體積的氯仿，混勻，4℃,12000 r/min,離心10 min.

5）重複步驟（4）1-2次，以蛋白層不出現為止；

6）取上清，-20℃沉澱1h,4℃,12000 r/min,離心10 min；

7）棄去上清液，用70%乙醇洗滌沉澱2次；

8）室溫下乾燥後（一般乾燥5-15 min）,溶於30-50 μl depc去離子水中，於-20℃或者-70℃下儲存備用。