RNA提取測的值挺好的,為什麼跑膠跑成這樣

2025-07-14 07:00:19 字數 2419 閱讀 4590

1樓:匿名使用者

你的膠圖沒有,是不是彌散的條帶,有可能是被rna酶消化了,導致拖帶,注意使用的離心管,槍頭進行滅菌,紫外照射等,儘量使用depc水,還有電泳的東西也注意用紫外或者是depc處理浸泡等,去除酶。

提取的總rna跑膠從大到小有幾條帶

2樓:變美的果團

提取的總rna跑膠從大到小有帶3條。三條是主帶。

哺乳動物的rna包括mrna,rrna,trna和du小rna,根據分子量和沉降係數的不同,rrna又可分為28s, 18s 和 的rrna。從rna的含量上看,rrna是幾種rna中最多的,高達90%以上,而mrna很少,只有1-2%,而其他兩種rna的分子量比較小,這就解釋了為什麼從凝膠電泳的結果上只能看到三條帶。而這三條帶的完整性,就代表了mrna的完整性。

3樓:北京索萊寶科技****

5s,18s,28s,5s應該最暗,28s應該最亮。。

和dna maker 比較的話,28s大概在5k左右,18s大概在3k左右,和5s是用瓊脂糖是分開不了的,只是一條很弱的條帶,在100bp左右,好的rna要求28s亮度是18s的兩倍,

4樓:網友

常見的有三個條帶,分別對應核糖體rna的28s,18s和5s條帶。

rna跑膠後什麼都沒有

5樓:北京索萊寶科技****

換新的電泳 同時用新的瓊脂糖凝膠電泳,另外條件改為180v 5-10min, 別忘了loading buffer染色!

換新的電泳液 同時uv下觀察下 是否有條帶 100v 電泳時間過長 rna極可能降解。

體外轉錄的rna跑膠拖帶,請問什麼原因

6樓:blue夏天的愛戀

轉錄插入片斷跟模板呢般情況應該比模板我都跑電泳嚴格說應該跑變性;嫌麻煩非變性快速(防止rna降解)十鍾即;拋帶兩條面模板麵條比較亮rna轉錄 功。

請詳細的描敘問題。

提取rna,用水溶解後跑膠,跑膠這段時間rna要儲存在那裡啊,

7樓:網友

幾個小時放在冰上沒問題!我現在正在做這個! 如果你當天還要用rna做下一步試驗的話就別凍起來,凍融迴圈也會導致其少量降解,如果下一步提取mrna的話直接用是最好的啦!

8樓:網友

20分鐘的話放冰上就可以了 好幾天的話就得放-80了。

9樓:網友

如果是純化完成後立即跑膠檢測的話,放置在冰上就可以了,但是要注意放置樣品的實驗器具是需要depc處理過的,且在放置的過程需是密閉的。

我提取了很多次rna,測出的od值260/280都很好,但就是跑膠時就降解。不知怎麼搞得!請高人指點!

10樓:網友

od值很好只能代表你的純度高並不能代表你提的完整。所以rna降解可能是你提的時候就降解了,也可能是跑膠的時候降解的。假設你提取的是完整的rna,可能出問題的步驟有以下:

buffer ,確定是使用的rna 專用的,且使用步驟是按說明書來的(有些是需要加熱,冷卻等步驟)

2.電泳時間長,需用的電泳電壓不恰當。

3.電泳液配置,電泳液中可能含rna酶,將你的樣品降解。

總之,降解可能是很多原因造成的,我沒看到你的電泳圖,也不知道你怎麼提取得,不好確定到底是什麼原因,你可以加我恰,可以討論下。

11樓:網友

這樣說吧,260/280是rna質量合格的必要條件,但不是充分條件。

即使rna降解成碎片了,260/280的值依然很好,它反映的只是rna的乙個純度,並不能反映rna結構的完整。

檢驗結構完整經典的方法就是跑膠,如果降解了,只能說明抽提失敗。

當然前提是你的電泳器材不能有汙染,建議梳子、船、跑膠板之類的耗材要定期清潔(可用溶液或20%雙氧水浸泡過夜),將rna電泳的耗材分類儲存。

12樓:北京華越洋生物

緩衝液最好是鮮配的,放久了會長菌。。

電泳槽,梳齒等器具應該做無rna酶處理,建議使用華越洋的外源rna酶清除劑,稀釋1000倍,浸泡5分鐘後使用。

提高電壓,讓電泳時間再短些。。。或者樣品裡面加rna酶抑制劑處理。。

如果是提取過程中導致的降解,建議:

trizol法的,研磨後trizol要足量,液氮要完全覆蓋被研磨的樣品。試劑盒(ctab,sds法),細胞裂解液要足量,藥劑裡面的很多成分能抑制內源性rna酶活性。

13樓:匡雅霜

配個濃度低的膠,,提高電壓,速戰速決。電泳液要新換,loading buffer 也要新換。

最近天熱,跑之前電泳液最好是涼的,不行的話,在電泳儀的的外面放些涼水,總之讓溫度降下來點。

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