1樓：北京索萊寶科技****
pcr產物電泳拖尾，可能有如下原因：a.模板不純。b.退火溫度偏低。c.酶量過多，dntp、mg2+濃度偏高。d.迴圈次數過多。
解決辦法：a.純化模板。b.適當提高退火溫度。c.降低酶量，適當降低dntp和鎂離子的濃度。d.減少迴圈次數。
sds-page電泳的時候有拖尾的現象是為什麼
2樓：北京索萊寶科技****
可能樣品不純，蛋白降解。
也可能是你的上樣量比較大，建議做個不同濃度的試試。
可能酶切時間太長或緩衝體系不好。
pcr產物電泳以後，怎樣測序
3樓：南京金益柏生物科技****
先要分割膠塊，將包含產物的膠塊進行溶解**並純化（也可不純化）。
剩下的就交給測序公司就ok了。
4樓：滎娜芊梓伊
第序列第。
二、考慮轉殖測序容易產結合。
5樓：靖雨遠雨
跑電泳的目的是為了看pcr是否成功。不跑電泳你怎麼知道你的pcr產物是什麼情況？
如何防止dna電泳拖尾
6樓：北京索萊寶科技****
pcr擴增有時出現塗抹帶或片狀帶或地毯樣帶。
其原因往往由於酶量過多或酶的質量差或酶的專一性不夠，dna模板量過大，dntp濃度過高，mg2 濃度過高，退火溫度過低，迴圈次數過多，模板長於3kd所引起。
減少酶量（一般以2單位taq dna聚合酶為基點，分梯度上下調一調，其他酶也差不多如此濃度，可以參考說明書）；加強dna聚合酶的專一性或調換另一**的專一性更好的dna聚合酶。
增加dna聚合酶的專一性。
1）改用專一性更強的dna聚合酶，或者使用兩種不同的dna聚合酶，減低酶量或調換另一**的專一性高的酶。更換dna聚合酶時，酶量不要太大，以免出現特異性擴增。 （2）酶製劑中的甘油可能也是干擾因素。
可以加入反應體系之前用超濾去除酶製劑中的甘油，若此操作引起酶的濃度過高，可以適當加雙蒸餾水稀釋。
3）為了加強taq dna聚合酶的專一性。 的專一性，可在反應體系中加入：的甜菜鹼或者5%的dmso可以提高pcr擴增效率，兩者可以增加taq dna聚合酶的穩定性。
適當減少dntp的濃度；減少dntp的濃度一般需要與降低mg2 濃度同方向偶聯進行，但是不必按同樣的比例。
適當降低mg2 濃 度，可以採用梯度遞減方式，以每次遞減，但是mg2 的終濃度不要低於。
縮短pcr反應的退火溫度時間或調高復性溫度。沒有重新設計引物之前，不要大範圍地變動反應體系的復性溫度，要在引物的tm少5-10度的範圍內變動。如果出現非特異性擴增，則在引物的tm少5-10度的範圍內把pcr反應的復性溫度提高1-3度。
使用梯度降低pcr。在以基因組dna為模板進行pcr擴增時，非特異性擴增較多，這時，最初的退火溫度選用比tm高5-10度。然後每隔1個迴圈，退火溫度降低1-2度，直至到達正常的tm附近的退火溫度。
採用使用專一性更強的梯度降低pcr、熱啟動pcr和巢式pcr。使用熱啟動模式。使用熱啟動時可以購買商用的pcr熱啟動酶，也可以用石蠟隔離模式。
巢式pcr也有現成的試劑盒可以購買。
保證pcr反應的dna模板的質量，要用電泳檢測一下分子量和純度，質量不好則要重新提取和純化dna模板；適當增加dna模板量，減少迴圈次數。
以上措施都不行時，最後就只能重新設計引物，加強引物的專一性。
適當減少dna模板量。
適當減少迴圈次數，一般也就迴圈25次就差不多了。
dna電泳時，pcr產物樣品裡要加maker嗎
7樓：北京索萊寶科技****
pcr實驗本身中不需要加入marker,但是在pcr過後跑電泳的時候需要加入marker.用來對比pcr產物的大小，看看產物的電泳條帶是不是符合你的預期的。
pcr中加marker的原因：
marker是人為的把一系列已知大小的dna（或已知質量的蛋白，當然pcr中用的是dna marker不是蛋白marker）混合在一起，在電泳的時候對照用。跑完電泳之後，會看到marker的有幾條清楚的條帶，而每條的大小都是可以在這個marker的說明書上查到的。所以，條帶對照，就大體知道你需要的條帶的大小範圍了。
pcr：
pcr(聚合酶鏈式反應）是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°c左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度（72°c左右），dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基於聚合酶製造的pcr儀實際就是乙個溫控裝置，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。
marker：
標記（marker），染色體上乙個可以被識別的區域（比如限制性內切酶的酶切點，基因的位置等）。標記的遺傳能夠被檢測出來。標記可以是染色體上有表達功能的部分（比如基因），也可以是沒有編碼蛋白質功能但遺傳特效能夠被檢測出來的部分。
8樓：徵求幫助
不是在樣品里加marker，marker是一些標準長度的dna，加在樣品旁邊的空裡，給樣品的dna長度做乙個比對。
dna酶切產物再純化後電泳，怎麼看起來變
9樓：北京索萊寶科技****
dna酶切產物再純化後電泳，怎麼看起來變長了你做膠**的那個柱子，只吸附dna,就算有蛋白和其他雜質也在膠**步驟中洗掉了，轉化效率低一般不會是這個原因。
你先看看這些步驟有沒有需要優化：
1.連線體系：粘末端是否匹配，載體與片段的比例、多少，buffer,酶量，等等，可以參照連線酶的說明書。
2.轉化體系：連線產物不要超過感受態量的10%,加入時不要吹打。
3.如果是自制的感受態，看一下轉化效率，是否反覆凍融，或者在室溫放置較長時間。實驗操作是否遵守流程等等。
4.確認一遍載體的抗性和培養基的抗性。
我的pcr跑的電泳的結果為什麼會是這樣
10樓：南京金益柏生物科技****
要跑好電泳圖，注意這些方面：
1、凝膠一定要加熱熔解完全，均勻，可以對著光亮的地方看看是否清澈；
2、一般情況下，梳子越薄而長，條帶越好看；
3、上樣量不宜過多，會造成條帶的相互擠壓；
4、如果點樣孔多餘，儘量將樣點到中間，儘量避免邊緣效應，如果電泳槽夠大，將膠放在中間一些，電場比較均勻；
5、電泳電壓一般在7-10v/cm之間；
6、做膠的緩衝液和跑膠的緩衝液濃度應該一致；
7、膠的濃度可能也會有一點點影響，一般用或者。
8、加樣時不要太快，讓其自然沉底，均勻分佈在電泳孔內。
9、電泳開始時可以採用低電壓使其跑出孔後，再調高電壓。
pcr電泳跑膠有些沒有出現條帶？
11樓：南京金益柏生物科技****
這個有許多原因，跑電泳有對照嗎？比如marker.如果沒有就是電泳問題，如果有，你看下有沒有引物二聚體，如果沒有，pcr整體肯定忘加東西了，需重做，如果有，就是你pcr體系本身有問題，需要優化，或是你的引物不好，需重新設計。
12樓：匿名使用者
是不是你的梳子和你的活動槽不配套。
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如果是單酶切，超螺旋質粒會變成開鏈dna，開鏈的dna在凝膠中泳動速度慢於超螺旋質粒，因此條帶會偏大，這是酶切充分的情況。如果不充分，就會有大小有差距的幾條帶 如果是雙酶切，而且片段大小適中，可以看見酶切的片段和載體，還有未切開的質粒。能不能區分超螺旋質粒和開鏈質粒，和所用瓊脂糖凝膠的濃度，電泳時間...
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