1樓：smile我的愛人
需要，rna實驗都是需要冰上操作的，以防降解。
提取rna需要在冰上操作嗎
2樓：網友
是的，rna很容易降解，尤其在水溶液中，提取時儘量在低溫進行。
做定量pcr之前需不需要檢測rna的完整性
3樓：無語翹楚
不需要，如果是做cdna文庫就要檢測rna的完整性。pcr只是擴增乙個片段。
追問：只是有些時候擴的ct值太大缺差，不知道是基因表達少還是降解了。我提的腫瘤標本的，以前在細胞株上做內參的ct值是15左右，現在提的組織標本內參的ct值都25左右了。
害怕自己的操作和處理標本有問題，最近都在查著方面的，請高手指導！非常感謝！
追答：主要還是要看是否有抑制物殘留被帶到pcr反應中。
追問：哦，我知道了，是我的標本有問題，現在做了兩個新鮮的腫瘤標本內參就15或16了，鬱悶啊，浪費了時間浪費了經費，啊，瘋了！
追答：核酸提取對後續的影響很大，要非常小心。 不知你是用的那個廠家試劑盒？ 有問題繼續和我聯絡。
追問：我磨扮賀用的是takara的rnaiso plus提的。請問液氮碾磨了組織後，加入plus裂解液後，室溫放置幾分鐘後，直接放在﹣80°裡，等幾天再提行不行呀？
追答：放在﹣80°裡裂解液的鹽會析出，化凍後，如果不加熱，就會影響提取效果瞎派。 如果加熱，就要影響rna的完整性。 不建議放在低溫冰箱裡。
takara rna提取試劑怎麼樣？omega的呢？
4樓：網友
應該說都不錯，兩個都算是名牌了。試劑盒是次要的，即使國產的試劑盒或者自制的試劑盒，用來提取都沒有任何問題，關鍵是提取的人。我就根據提取的原理自制過試劑盒，效果很不錯。
建議你先把提取中的各個步驟的原理徹底弄清楚了，再提取就基本沒問題了。希望能幫到你。
5樓：北京華越洋生物
大部分是ctab法，液氮研磨加細胞裂解液釋放rna，再酚氯仿離心去蛋白雜質，再漂洗上離心吸附柱，再洗脫。。。國內外試劑盒幾乎大同小異。。
試劑盒國產就很不錯，時代不同了，應該對國產品牌有點自信，給與點支援。。
求提取毒種rna方法
6樓：
給你推薦個rna提取輔助試劑，外源rna酶清除劑，避免檯面，洗頭，離心管這樣的耗材引入的外源性rna酶對rna的降解。華越洋生物。
提取病毒rna，建議你買乙個我們公司的病毒rna提取試劑盒。絕對好使。
7樓：rebecca淺川
異硫氰酸胍提取法(這是提禽流感病毒的詳細步驟，供參考)
1、取200ul樣品數+陰性對照+陽性對照加入滅菌eppendorf管；
2、加600ul異硫氰酸胍，然後加入對照和樣品，再加200ul氯仿，顛倒混勻；
rpm離心15min；
4、在第3步離心快結束時，另取同樣多eppendorf管，加入400ul於-20℃預冷的異丙醇；
5、取第3步離心的上清(一定不要吸取到中間白色層，第3步離心結束往外拿的時候，管子儘量不要傾斜)轉移到第4步準備的管中，顛倒混勻；
rpm離心15min，輕輕倒去上清，在吸水紙上儘量沾幹液體；
7、加600ul75％乙醇，顛倒數次以洗滌殘存異丙醇；
rpm離心15min，輕輕倒去上清，在吸水紙上儘量沾幹液體；
rpm離心10sec，將管壁殘存液體甩到底部，用微量槍頭吸乾，室溫乾燥2－3min(不可過分乾燥，防止下一步rna不溶解)；
10、加入20uldepe水(加入depc的純水高壓後的水即為depe水)，輕輕混勻溶解離心5sec，冰上儲存備用(最好2小時內使用，以免rna降解)。
trizol和試劑盒提rna的區別
8樓：匿名使用者
目的掌握rna提取的基本技術，瞭解rna提取過程中的各種注意事項。二、原理rna提取是分子生物學實驗中難度較大的實驗技術。rna提取和dna提取有類似的地方，因為它們都是核酸，都具有較好的水溶性。
提取rna首先破碎細胞，然後用提取液將rna溶出，反覆抽提去除蛋白質 ……
用試劑盒提取的rna反轉錄後一般稀釋多少倍
9樓：華堂春風綻開
如果你是用反轉錄後的cdna跑電泳，出現好多條帶或彌散狀是正常的，因為你提取的rna不可能是完整的一條鏈，而隨機引物和特異引物擴增的時候是有肯能把大小不同的rna同時進行擴增的。
你可以用你的目的引物，用反轉錄第一鏈進行擴增，看看能不能得到目的片段。
提取基因組RNA時，怎樣避免產物降解？
操作時保持低溫，速度儘量快，周圍環境中儘量不要有rna酶 少說話，有條件的話噴灑rna酶抑制劑 外源rna酶清除劑，可以搞定。噴灑檯面，浸泡處理耗材，去除外源rna酶清除劑，避免其降解。具體操作注意都能夠搜到，我只想說一下我的經驗，第一步很重要，剩下的只要細心一下都不會出現問題。如何防止核酸降解基因...
RNA提取測的值挺好的，為什麼跑膠跑成這樣
你的膠圖沒有，是不是彌散的條帶，有可能是被rna酶消化了，導致拖帶，注意使用的離心管，槍頭進行滅菌，紫外照射等，儘量使用depc水，還有電泳的東西也注意用紫外或者是depc處理浸泡等，去除酶。提取的總rna跑膠從大到小有幾條帶 提取的總rna跑膠從大到小有帶條。三條是主帶。哺乳動物的rna包括mrn...
在牛肝中提取rna時,要注意些什麼問題
一些rna提取方法，在進行具體實驗時，應根據研究物件的性質，提取核酸的用途而對上述方法在操作步驟和試劑使用量上作一定的修改。1 在核酸提取時，為了增加細胞的裂解度，增加核蛋白複合體破碎度，以釋放更多的遊離核酸，在操作中常要用到溶菌酶和蛋白酶k，在確保沒有核酸水解酶存在的前提下，酶反應時間越長越好。2...