1樓:匿名使用者
正常操作實驗中提取質粒應該出現2條條帶,由於空間結構的差異,從上至下第一條為較為鬆散的dna環狀結構,第二條是環狀dna超螺旋結構,有時往往會存在第三條帶(出現在鬆散環狀質粒dna條帶上方),即為dna開環結構(由於質粒提取過程中閉合環狀dna遭到破壞,環狀結構開啟變為直鏈dna)。
質粒dna電泳會有三條帶,最遠的是線形dna(ldna):質粒的兩條鏈均斷裂;線性分子;中間的是開環dna(ocdna):質粒的一條鏈斷裂;鬆弛的環狀分子;共價閉合環狀dna(cccdna):
質粒的兩條鏈沒有斷裂;超螺旋這是由於在質粒提取過程中,機械力、酸鹼度、試劑等的原因,使質粒dna鏈發生斷裂。而質粒dna相對於基因組dna小很多,所以比較容易區分開基因組dna電泳一般是1條帶,雖然在你抽提過程中也會發生斷裂,形成幾十至幾百kb的大片段。但是我們一般用1%的膠,無法區分不同大小的dna,所以看起來像是一條帶。
如果配成的膠再加lamda hindiii marker,適當延長跑膠時間,就應該會出現幾條帶了。
pcr電泳跑膠有些沒有出現條帶?
2樓:南京金益柏生物科技****
這個有許多原因,跑電泳有對照嗎?比如marker.如果沒有就是電泳問題,如果有,你看下有沒有引物二聚體,如果沒有,pcr整體肯定忘加東西了,需重做,如果有,就是你pcr體系本身有問題,需要優化,或是你的引物不好,需重新設計。
3樓:匿名使用者
是不是你的梳子和你的活動槽不配套。
求助:pcr產物酶切後電泳不出條帶
4樓:網友
有膠圖麼?
如果是空的什麼也沒有,可以考慮:1、pcr產物有問題;2、電泳跑反了或者跑久了,dna跑出了膠;3、制膠的問題,如忘加eb等,或加eb等時膠溫度過高。
其中pcr產物問題可以考慮原因:引物是否正確、程式設定的退火溫度是否過高、樣本提取等原因。
tail pcr 電泳後沒有條帶的原因是什麼
5樓:北京索萊寶科技****
模板降解,引物特異性差,試劑失活,擴增條件不適,退火溫度不適,建議重新提取模板,驗證引物特異性,並採用高特有試劑盒擴增(高保真酶擴增),嘗試降落pcr,摸索退火溫度(引用,僅供參考)
為什麼以前跑電泳的陽性對照有條帶,過了半個月後又重新做陽性pcr跑電泳,結果沒有條帶?原因有哪些?
6樓:網友
重新檢測你的系統,陽性沒出來就說明你這次的實驗全部都失敗了,把所有的試劑全部檢查一遍,重新再做一次吧。
7樓:任羿
1、pcr試劑汙染,加錯,失活;
2、模版被降解;
3、pcr儀壞了。
8樓:網友
也有可能是你的陽性dna降解了。
9樓:網友
可能是模板降解了吧。
pcr產物電泳,目的條帶跑出來一次,相同的條件卻跑不出帶了,引物二聚體也沒有,什麼原因?
10樓:網友
可能是引物有問題,有沒有做陽性對照?
11樓:網友
檢測條件是否正確,例如紫外波長。
我做分子實驗,pcr以後電泳監測空白對照居然有亮條帶出現,一開始以為是汙染,可以連續幾次做都是這種情況
12樓:網友
有很多情況啊,像一樓說的,引物二聚體也可能,不過引物二聚體的位置在marker的末端,會比較模糊,比陽性對照的條帶要粗。你可以截個圖上來,讓大家看看其他泳道上的帶是什麼情況。如果空白對照的亮帶在別的泳道里也有,就是汙染了,做pcr體系用的水很容易被汙染,我的引物也有過汙染的時候,電泳液裡也可能留下跑膠時跑出去的核酸物質。
不知道你p的是質粒,菌液,cdna,還是細胞培養經過處理的產物。
13樓:錢塘書生
條帶大小?
引物二聚體?
氣溶膠汙染?
pcr 電泳 沒有條帶
14樓:啦炒
重複一遍再來發帖。自己先儘量剔除操作失誤別人才能更好的幫你。
乙個亮乙個不亮,如果每次都這樣,那說明模板量少,或是目標條帶短(條帶短自然結合eb少)。其他像擴增效率,試劑汙染等因素概率比較少。
2,沒產物:一來引物有沒有問題,二,模板有沒有問題,三,你的pcr條件是否合適你的引物。
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