酚試劑法測定蛋白質濃度有何優缺點

1樓：捷駿奇

優點：靈敏度高，比雙縮脲法靈敏得多。

缺點：費時間較長，要精確控制操作時間，標準曲線也不是毀伍嚴格的直線形式，且專一性較差，干擾物質較多。對雙縮脲反應發生干擾的離子，同樣容易干擾folin-酚反應（lowry反應）。

而且對後者的影響還要大得多。酚類、檸檬酸、硫酸銨、tris緩衝液、甘氨酸、糖類、甘油等均有干擾作用。濃度較低的尿素（，硫酸納（1%），硝酸納（1%），三氯乙酸（，乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（等溶液對顯色無影響，但這些物質濃度高時，必須作睜餘枯校正曲線。

含硫酸銨的溶液，只須加濃碳酸鈉—氫氧化鈉溶液，即可顯色測定。若樣品酸度較高，顯色後會色淺，則必須提高碳酸鈉—氫氧化鈉溶液的濃度1~2倍。

原理。此法的顯色原理與雙縮脲法是相同的，只是加入了第二種試劑，即folin—酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。這兩種顯色反應產生深藍色的原因是：

在鹼性條件下，蛋白質中的肽鍵與銅結合生成複合物。 folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產生深藍色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。在一定的條件下，藍色深度與蛋白的量成正比。

注意事項。進行測定時，加folin—酚試劑時要特別小心，因為該試劑僅在酸性ph條件下穩定，但上述還原反應只在ph=10的情況下發生，故當folin一酚試劑加到鹼性的銅—蛋白質溶液中時，必須立即混勻，以便在磷鉬酸—磷鎢酸試劑被破壞之前，還原反應即能發生。此法也適用於酪氨酸和色氨酸的定量測悉洞定。

2樓：匿名使用者

優點：是靈敏度高，比雙縮脲法靈敏得多燃配；重複性好。顏色深，析光度。

缺點：是費時間較長，要梁段改精確控制操作時間橡判，標準曲線也不是嚴格的直線形式，且專一性較差，干擾物質較多。

以酚試劑測定蛋白質時其呈色反應為

3樓：考試資料網

答案】：c本題考查酚試劑發測定蛋白質原理，蛋白質中肽鍵在戚芹帆鹼性溶液中與銅離子形成高雹絡合物，此絡合物能使酚試劑中的磷鉬酸還原產生首談藍色化合物。

folin酚試劑法測定蛋白質含量的注意事項

4樓：磐芽rxi旑

進行測定時，加f olin—酚試劑時要特別小心，因為該試劑僅在酸性ph條培纖件下穩定，但上述還原反應。

只在ph=10的情況下發生慎中消，故寬知當folin一酚試劑加到鹼性的銅—蛋白質溶液中時，必須立即混勻，以便在磷鉬酸—磷鎢酸試劑被破壞之前，還原反應即能發生。

此法也適用於酪氨酸。

和色氨酸的定量測定。

說明如何選擇適宜的方法以保證蛋白質濃度測定的準確性

5樓：網友

1）蛋白質的不同對測定結果的影響。因此測量過程中如果條件允許，應儘量使用相近的蛋白質做標準曲線。

修正測量引數，以便得到更為準確的數值。

2）溶液中干擾物質的影響。因此測量時應儘量排除干擾物質，同時選擇合適的參比溶液。

3）裂祥閉溶劑吸收的影響。如果以一些在紫外區有吸收的物質做溶劑（例如醇、酮類），會對測量結果產生很大的肆裂影響。因此測量時儘量不要使用此類溶劑，或者在測量時宴基選擇合適的參比。

6樓：網友

規範的操作，合格的試劑，準確的方法。這問題太虛了。